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    在室溫中進行ELISA試劑盒顯色定性測定

    發(fā)布時間: 2016-12-01  點擊次數(shù): 1049次

    ELISA試劑盒此刻酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)品。反響的溫度和時刻仍是影響顯色的要素。在必定時刻內(nèi),陰性孔可堅持無色,而陽性孔則隨時刻的延伸而呈色加強。恰當(dāng)進步溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中,參加底物后的反響溫度和時刻應(yīng)按規(guī)則力求。ELISA試劑盒時刻通常不需要嚴格控制,有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色狀況恰當(dāng)縮短或延伸反響時刻,及時判別。
    OPD底物顯色通常在室外溫或37 ℃反響20-30分鐘后即不再加深,再延伸反響時刻,可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,顯色反響應(yīng)避光進行,顯色反響結(jié)束時參加停止液停止反響。OPD產(chǎn)品用硫酸停止后,顯色由橙轉(zhuǎn)向棕。
    TMB受光照的影響不大,ELISA試劑盒可在室溫中置于操作臺上,邊反響調(diào)查成果。但為確保實驗成果的穩(wěn)定性,宜在規(guī)則的恰當(dāng)時刻閱覽成果。TMB經(jīng)HRP作用后,約40分鐘顯色達,隨即逐步削弱,至2小時后即可*衰退至無色。TMB的停止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反響停止。這類停止劑尚能使藍色保持較長時刻(12-24小時)不褪,是目視判別的杰出停止劑。此外,各類酸性停止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成,此刻可用特定的波長(450 nm)測讀吸光值。
    ELISA試劑盒比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中。以軟板為載體的實驗,需先將板置于規(guī)范96孔的座架中,才可進行比色。在加底物液顯色前,先將軟板邊際剪凈,這樣,此板就可*平妥坐入座架中。

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