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    ELISA試劑盒備案參考評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

    發(fā)布時(shí)間: 2018-03-29  點(diǎn)擊次數(shù): 1550次

    1、標(biāo)準(zhǔn)曲線
    ELISA試劑盒定量方法:標(biāo)準(zhǔn)曲線至少由5個(gè)濃度組成,測(cè)定次數(shù)不少于5次,以確定工作濃度范圍和IC50范圍。
    定性方法:工作濃度范圍通過陰性、臨界值濃度和陽性的樣品測(cè)定來確定,每個(gè)濃度重復(fù)不少于5次,濃度與響應(yīng)值之間應(yīng)有一定的關(guān)系。
    2、檢測(cè)限和定量限
    檢測(cè)限:20份空白樣品測(cè)定均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)差。
    定量限:應(yīng)大于標(biāo)準(zhǔn)曲線中zui低濃度點(diǎn)。對(duì)于定量方法,應(yīng)對(duì)該濃度樣品至少測(cè)定6次進(jìn)行驗(yàn)證,而不能通過外延法推斷。
    3、臨界值(cut-off值)的確定
    對(duì)于有zui高殘留*的藥物,檢測(cè)方法的臨界值為20份添加MRL濃度的樣品重復(fù)3次測(cè)定的均值減去1.64倍標(biāo)準(zhǔn)差,即95%置信限處。
    對(duì)于禁用藥物,檢測(cè)方法的臨界值為定量限,該值應(yīng)達(dá)到*的指標(biāo)。
    4、精密度和準(zhǔn)確度
    ELISA試劑盒對(duì)于有zui高殘留*的藥物,添加濃度為MRL及MRL上下各一個(gè)濃度;對(duì)于禁用藥物,添加濃度為定量限和2倍定量限,每個(gè)添加濃度至少測(cè)定5個(gè)平行樣,并至少進(jìn)行3批實(shí)驗(yàn)(不同檢測(cè)日期,不同標(biāo)準(zhǔn)曲線,不同批次試劑盒)。
    (1)準(zhǔn)確度:回收率范圍大于40%或符合相應(yīng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
    (2)精密度:以變異系數(shù)表示。
    批內(nèi)變異系數(shù):每批平行樣之間的變異系數(shù)小于或等于25%,對(duì)于禁用藥物小于或等于30%.
    批間變異系數(shù):所有樣品之間的變異系數(shù)值小于或等于30%,對(duì)于禁用藥物小于或等于40%.
    定性方法:陰性和陽性樣品各測(cè)定不少于50份,確定假陽性率和假陰性率。
    5、交叉反應(yīng)
    試劑盒與待檢藥物類似物、代謝物或共同存在的藥物測(cè)定交叉反應(yīng)率。
    6、保存期
    保存期通過保存條件的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果確定。
    7、ELISA試劑盒復(fù)核試驗(yàn)
    復(fù)核試驗(yàn)主要內(nèi)容應(yīng)包括:
    (1)定量方法:檢測(cè)限、IC50以及至少兩個(gè)添加濃度的準(zhǔn)確度和精密度,并與理化方法(或與具代表性進(jìn)口試劑盒)比較。
    (2)定性方法:檢測(cè)限、假陽性率和假陰性率。

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