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    常見的免疫檢測(cè)技術(shù)

    發(fā)布時(shí)間: 2011-05-16  點(diǎn)擊次數(shù): 1468次

    常見的免疫檢測(cè)技術(shù)

    (一)皮內(nèi)試驗(yàn) (intrader rpmal test,ID) 宿主在病原體刺激后,體內(nèi)產(chǎn)生親細(xì)胞性抗體(IgE和IgG4)。當(dāng)其與相應(yīng)抗原結(jié)合后,肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒,釋放生物活性物質(zhì),引起注射抗原的局部皮膚出現(xiàn)皮丘及紅暈,以此便可判斷體內(nèi)是否某有種特異性抗體存在。

    (二)免疫擴(kuò)散(immunodiffusion)和免疫電泳(immunoelectrophoresis)

    1.免疫擴(kuò)散 于一定條件下,抗原與抗體在瓊脂凝膠中相遇,在二者含量比例合適時(shí)形成肉眼可見的白色沉淀。本法有兩種類型:①單相免疫擴(kuò)散:將一定量的抗體混入瓊脂凝膠中,使抗原溶液在凝膠中擴(kuò)散而形成沉淀環(huán),其大小與抗原量成正比;②雙相免疫擴(kuò)散:將抗原與抗體分別置于凝膠板的相對(duì)位置,二者可自由擴(kuò)散并在中間形成沉淀線。用雙相免疫擴(kuò)散法既可用已知抗原檢測(cè)未知抗體,也可用已知抗體檢測(cè)未知抗原。

    2.免疫電泳 是將免疫擴(kuò)散與蛋白質(zhì)凝膠電泳相結(jié)合的一項(xiàng)技術(shù)。事先將抗原在凝膠板中電泳,之后在凝膠槽中加入相應(yīng)抗體,抗原和抗體雙相擴(kuò)散后,在比例合適的位置,產(chǎn)生肉眼可見的弧形沉淀線。


    (三)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)

    vvv 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理是將抗原或抗體與底物(酶)結(jié)合,使其保持免疫反應(yīng)和酶的活性。把標(biāo)記的抗原或抗體與包被于固相載體上的配體結(jié)合,再使之與相應(yīng)的無(wú)色底物作用而顯示顏色,根據(jù)顯色深淺程度目測(cè)或用酶標(biāo)儀測(cè)定OD值判定結(jié)果。


    (四)間接熒光抗體試驗(yàn) (indirect fluorescent antibody method,IFA)

    vvv 本法用熒光素(異硫氰基熒光素)標(biāo)記第二抗體,可以進(jìn)行多種特異性抗原抗體反應(yīng),即可檢測(cè)抗原又可檢測(cè)抗體。本法具有較高的敏感性、特異性和重現(xiàn)性等優(yōu)點(diǎn),除可用于寄生蟲病的快速診斷,流行病學(xué)調(diào)查和疫情監(jiān)測(cè)外,還可用于組織切片中抗原定位以及在細(xì)胞和亞細(xì)胞水平觀察和鑒定抗原、抗體和免疫復(fù)合物。

    (五)對(duì)流免疫電流試驗(yàn) (counter-immunoelectrophoresis,CIE) 對(duì)流免疫電泳試驗(yàn)是以瓊脂或瓊脂糖凝膠為基質(zhì)的一種快速,敏感的電泳技術(shù)。既可用已知抗原檢測(cè)抗體,又可用已知抗體檢測(cè)抗原。反應(yīng)結(jié)果可信度高,適用范圍廣。以本法為基礎(chǔ)改進(jìn)的技術(shù)有酶標(biāo)記抗原對(duì)流免疫電泳(enzyme-linked antigen counterimmunoelectrophoresis,ELACIE )和放射對(duì)流免疫電泳自顯影(radio-immuno-counterelectrophoretic autography,RCIEPA)等技術(shù)。二者克服了電泳技術(shù)本身不夠靈敏的弱點(diǎn)。

     


    (六)免疫印跡試驗(yàn)(immunobloting technique,ELIB) 免疫印跡試驗(yàn)又稱免疫印漬或western blot,是由十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酸胺凝膠電泳(SDS-PAGE),電轉(zhuǎn)印及固相酶免疫試驗(yàn)三項(xiàng)技術(shù)結(jié)合為一體的一種特殊的分析檢測(cè)技術(shù)。本法具有高度敏感性和特異性。

     

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