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    玉米赤霉酮檢測試劑盒說明書

    發(fā)布時間: 2011-06-11  點擊次數(shù): 1358次

                    玉米赤霉酮檢測試劑盒

    一、說明:玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)又稱F-2 毒素,主要成分為禾谷鐮刀菌和鐮刀菌等產(chǎn)生的2,4-二羥基苯甲酸內(nèi)酯類化合物。ZEN 主要污染玉米、麥類、谷物等作物,具有很強的雌性激素作用,可引起豬、大鼠、小鼠、家禽等動物的雌激素過多癥和嚴重的生殖道癥狀及不孕癥,還具有免疫毒性、基因毒性等,對人也有雌激素作用。玉米赤霉烯酮一般用薄層色譜、液相色譜法檢測, 但因其操作繁雜、費用昂貴而影響實際應用。而使用玉米赤霉烯酮ELISA試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中玉米赤霉烯酮殘留。
     
    二、試驗原理
     本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在酶標板微孔條上預包被玉米赤霉烯酮抗原,樣本中玉米赤霉烯酮和此抗原競爭玉米赤霉烯酮的抗體,酶標二抗催化TMB底物顯色,樣本吸光值與其含有的玉米赤霉烯酮成負相關,與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中玉米赤霉烯酮的含量。

    三、適用范圍
    可定性、定量檢測玉米及玉米制品、飼料等樣本中的玉米赤霉烯酮。

     五、檢測步驟
    測定前應須知:
    1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫(20~25℃)。
    2、使用之后立即將所有試劑放回2~8℃。
    3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
    4、在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,用蓋板膜封住微孔板。
    5、標品里含有玉米赤霉烯酮,操作時應戴手套操作,避免皮膚接觸。

    操作步驟:
    1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
    2、取出需要數(shù)量的微孔板,將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封,保存于2~8℃。不要冷凍。
    3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
    4、編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
    5、加標準品/樣本:加標準品/樣本50l到對應的微孔中,再加入ZEN酶標物50l/孔,zui后加入ZEN抗試劑50l/孔。輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境中反應30min。
    6、洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌工作液300l/孔,充分洗滌5次,每次間隔30s,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。
    7、顯色:加入底物液A液50l/孔,再加底物液B液50l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境反應15min~20min。
    8、測定:加入終止液50l/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,請在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測定每孔OD值。(若無酶標儀,則不加終止用目測法可進行判定)。


    六、注意事項
    1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20~25℃)會導致所有標準的OD值偏低。
    2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標準曲線不成線性,重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
    3、每加一種試劑前需將其搖勻。
    4、反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
    5、不要使用過了有效日期的試劑盒;也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
    6、儲存條件
    保存試劑盒于2~8℃,不要冷凍,將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
    7、在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時間為15~20min即可。若顏色較淺,可延長反應時間到30min(或更長),但不得超過30min。反之,則減短反應時間。
    8、濃縮洗滌液如有結(jié)晶屬正常現(xiàn)象,請加熱溶解后使用。
    9、該試劑盒*反應溫度為25℃,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

    八、貯藏條件及保存期
    貯藏條件:保存試劑盒于2~8℃。
    保存期:該產(chǎn)品有效期為12個月。
     

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