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    無菌操作技術(shù)(細胞培養(yǎng))

    發(fā)布時間: 2011-12-05  點擊次數(shù): 1549次

    無菌操作技術(shù)(細胞培養(yǎng))
    1. 實驗進行前,無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面,并開啟無菌操作臺風扇運轉(zhuǎn)10 分鐘后,才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘以上后,再進行下一個細胞株的操作。
    2. 無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。實驗用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域,勿在邊緣的非無菌區(qū)域操
    作。
    3. 小心取用無菌的實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口,亦不要在打開的容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
    4. 工作人員應(yīng)注意自身的安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染的細胞株應(yīng)特別小心操作,并選擇適當?shù)燃壍臒o菌操作臺(至少Class II)。操作過程中,應(yīng)避免引起aerosol 的產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖銳針頭的傷害等。
    5. 定期檢測下列項目:
    5.1. CO2 鋼瓶的CO2 壓力
    5.2. CO2 培養(yǎng)箱的CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換)。
    5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow 壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時/預(yù)濾網(wǎng),3000 小時/HEPA)。
    6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),定期更換水槽的水。
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