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    人白細(xì)胞介素酶聯(lián)免疫分析使用說(shuō)明書

    發(fā)布時(shí)間: 2016-05-05  點(diǎn)擊次數(shù): 917次

    人白細(xì)胞介素酶聯(lián)免疫分析使用說(shuō)明書使用目的:
    本試劑盒用于測(cè)定人血清、唾液及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞介素 1β(IL-1β)含量。
    人白細(xì)胞介素酶聯(lián)免疫分析實(shí)驗(yàn)原理
    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人白細(xì)胞介素 1β(IL-1β)水平。用純化的人
    白細(xì)胞介素 1β(IL-1β)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入
    白細(xì)胞介素 1β(IL-1β),再與 HRP標(biāo)記的白細(xì)胞介素  1β(IL-1β)抗體結(jié)合,形成抗體
    -抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在    HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化
    成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素 1β(IL-1
    β)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人白細(xì)胞介素 1β(IL-1β)濃度。

    標(biāo)本要求

    1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
    馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
    2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
    人白細(xì)胞介素酶聯(lián)免疫分析使用說(shuō)明書操作步驟

    3.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。
    4.加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
    5.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
    6.配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
    7.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。
    8.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
    9.溫育:操作同 3。
    10.洗滌:操作同 5。
    12.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
    13.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
    14.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

    人白細(xì)胞介素酶聯(lián)免疫分析操作程序總結(jié):
    計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo), OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
    OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

    人白細(xì)胞介素酶聯(lián)免疫分析使用說(shuō)明書注意事項(xiàng)
    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
    用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
    3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
    控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
    4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本  OD值
    大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)
    算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物請(qǐng)避光保存。
    7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
    9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
    10.如與英文說(shuō)明書有異,以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。
    保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6個(gè)月
     
     

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